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微生物艱難梭菌毒素A(TCD-A)ELISA試劑盒技術(shù)使用說(shuō)明書(shū)
BS-5181 微生物艱難梭菌毒素A(TCD-A)ELISA試劑盒
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法檢測(cè)樣本中TCD-A濃度，通過(guò)預(yù)包被的抗TCD-A單抗捕獲抗原，結(jié)合生物素標(biāo)記的二抗及HRP酶偶聯(lián)物，經(jīng)TMB底物顯色后，在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，濃度與OD值呈正相關(guān)。
操作流程
樣本處理
糞便樣本：取0.2g糞便加入0.5ml稀釋液，混勻后離心(2000rpm，10分鐘)，取上清檢測(cè)。
細(xì)胞培養(yǎng)上清：直接檢測(cè)或稀釋后使用，避免反復(fù)凍融。
試劑準(zhǔn)備
洗滌液：20倍濃縮液用蒸餾水稀釋至1倍。
標(biāo)準(zhǔn)品：4000pg/ml母液按梯度稀釋(2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0 pg/ml) 。
檢測(cè)步驟
加樣：標(biāo)準(zhǔn)品/樣本(50μl/孔)與檢測(cè)抗體溫育1小時(shí)。
顯色：TMB底物避光反應(yīng)15分鐘，2M硫酸終止。
讀數(shù)：酶標(biāo)儀450nm波長(zhǎng)測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算濃度。
關(guān)鍵注意事項(xiàng)
樣本要求：糞便樣本需新鮮采集，避免溶血或污染;細(xì)胞上清需離心去除顆粒物。
試劑穩(wěn)定性：未拆板條2-8℃保存，標(biāo)準(zhǔn)品溶解后需分裝凍存。
質(zhì)量控制：建議設(shè)置復(fù)孔，回收率應(yīng)達(dá)80-120%。
安全防護(hù)：處理糞便樣本需按生物安全規(guī)范操作。
數(shù)據(jù)分析
標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)需滿(mǎn)足R2≥0.99，典型靈敏度為7pg/ml，檢測(cè)范圍31.25-2000pg/ml
注：以上僅供參考，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢(xún)技術(shù)老師。
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