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大鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)如下：
1. 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>
本試劑盒用于測(cè)定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)的含量?。
2. 實(shí)驗(yàn)原理
采用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)水平。用純化的大鼠巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品及HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色，TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品中的巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(MIF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度?。
3. 試劑盒組成
封板膜：2片
說(shuō)明書(shū)：1份
密封袋：1個(gè)
標(biāo)準(zhǔn)品：2700ng/L，0.5ml×1瓶
酶標(biāo)包被板：1×48或1×96
樣品稀釋液：3ml×1瓶或6ml×1瓶
顯色劑A液：3ml×1瓶或6ml×1瓶
顯色劑B液：3ml×1瓶或6ml×1瓶
終止液：3ml×1瓶或6ml×1瓶
濃縮洗滌液：(20ml×20倍)×1瓶或(20ml×30倍)×1瓶?。
4. 樣本處理及要求
血清?：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)，收集上清?。
血漿?：使用EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后離心，收集上清?。
尿液?：無(wú)菌管收集，離心后取上清?。
細(xì)胞培養(yǎng)上清?：檢測(cè)分泌性成分時(shí)，直接收集上清;檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)成分時(shí)，需反復(fù)凍融細(xì)胞懸液后離心?。
組織標(biāo)本?：切割后稱(chēng)重，加入PBS勻漿，離心后取上清?。
5. 實(shí)驗(yàn)步驟
將標(biāo)準(zhǔn)品、標(biāo)本依次加入包被微孔板中，溫育并洗滌?。
加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，溫育并洗滌?。
加入底物TMB顯色，反應(yīng)終止后測(cè)定吸光度(OD值)?。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品濃度?。
6. 注意事項(xiàng)
試劑盒需在-20℃保存，開(kāi)封后酶標(biāo)板需密封保存?。
標(biāo)本采集后應(yīng)盡快檢測(cè)，避免反復(fù)凍融?。
實(shí)驗(yàn)操作需在相同環(huán)境條件下進(jìn)行，以減少誤差?。
7. 結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值計(jì)算濃度，再乘以稀釋倍數(shù)?。
以上為實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)的詳細(xì)內(nèi)容，供參考?。
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